[분자생물학 실험] DNA 추출 <실험 적용 원리편>

• 세부 매뉴얼에 적용된 원리

 

◾ 계면활성제는 세포막, 핵막 등을 무너뜨려 DNA가 유리되도록 한다.

◾ Proteinase K는 단백질 분해효소로 광범위하게 다양한 단백질을 분해할 수 있다. 따라서 DNA가 세포 용해액에 유리되게 한다. 최적pH8이나 넓은 pH 범위에서 안정적이고, 반응온도를 50~60℃로 상승시키면 활성이 증가한다.

 

 

◾ RNase A는 리보뉴클레이스라고 하며 RNA를 분해해서 올리고뉴클레오타이드로 만드는 반응을 촉매하는 효소이다. RNA분자 내부로부터 분해하기 때문에 엔도리보뉴클레이스에 해당한다. RNA가 없이 순도높은 DNA를 추출하고자 할 때 사용한다.

 

 

 

◾ 높은 농도의 염 용액에서 양전하 이온과 음전하인 DNA가 결합하고 이 양전하 이온은 실라카 겔에 결합하여 DNA와 실리카 겔의 가교 역할을 한다.

◾ 에탄을을 사용하는 이유는 DNA 용해도를 낮춰 실리카 겔에 보다 잘 결합하게 하기 위해서이다.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

◾ Wash buffer의 조성은 20mM NaCl, Tris-HCl, pH7.5를 기본으로 하며 80% 정도는 absolute 에탄올이 들어 있다.

◾ 에탄올을 사용하는 이유는 DNA 용해도를 낮추어 Wash buffer의 DNA가 씻겨 나오는 것을 방지하기 위해서이다.